大豆胰蛋白酶抑制因子检测

大豆胰蛋白酶抑制因子检测主要是检测发酵豆粕，今天为大家介绍大豆胰蛋白酶抑制因子检测的详细步骤

第一步：试剂盒复温 因为大豆胰蛋白酶抑制因子检测试剂盒储藏有要求，需要在2-8℃干燥保存，一般都是在冰箱中储藏，使用前需要提前取出恢复到室内温度。

第二步：样本提取工作液、洗涤工作液配置

1、根据使用用量取试剂盒中的30x浓缩样本提取液，按照1:29的体积比例，用蒸馏水稀释到工作浓度，混匀，该工作液为样本提取液，提取样本时使用。
2、根据使用用量取试剂盒中的20x浓缩洗液，按照1:19的体积比例，用蒸馏水稀释到工作浓度，混匀，该工作液为洗涤工作液，提取洗板时使用。

第三步：样本称量 取代表性的样本粉碎成可以过60目筛以上的颗粒，称取0.3克样本。称量允许误差为0.0003克

第四步：提取 将称量好的样本倒入50ml离心管中，加入30ml 1X提取工作液，37℃水浴震荡提取1小时，注意转速大鱼200rpm。提取样本不可以过夜使用，既现提现用。

第五步：离心 4000rpm离心机离心5分钟

第六步：稀释 取离心后的上清液100μl 加入600μl蒸馏水混匀，再去100μl混合液加入900μl蒸馏水混匀待测

第七步：加样 去适量的检测板条，加入校准品、50μl待测样本，并记录其中的位置，再向每孔中加入抗体工作液50μl，拍板1分钟，然后盖上盖板膜37℃孵育9分钟

第八步：洗板 孵育结束后甩掉微孔中的溶液，注满1x洗涤工作液。重复洗涤4次。于吸水纸上拍干。

第九步：加酶 在微孔中各加入10μl酶标试剂，盖上盖板膜，37℃孵育10分钟

第十步：洗板 孵育结束后甩掉微孔中的溶液，注满1x洗涤工作液。重复洗涤4次。于吸水纸上拍干。

第十一步：显色 每微孔中加入显色液100μl，盖上盖板膜，37℃避光孵育10分钟。

第十二步：终止读数 每微孔中加入100μl终止液，立即与450/630nm双波长下读取吸光度值。 到此整个大豆胰蛋白酶抑制因子检测已经完成。

发酵豆粕中大豆胰蛋白酶抑制因子的含量，可以直观的体现出发酵豆粕中抗营养因子的钝化情况，当然了大豆抗营养因子除了包含大豆胰蛋白酶抑制因子，还包括大豆凝集素、大豆球带白（大豆11s蛋白）、β-伴大豆球蛋白（大豆7s蛋白）以及大豆凝集素（SBA），如果要判定发酵豆粕工艺是否完善，这些大豆抗营养因子都需要进行检测

最后更新时间：2024-09-04 17:00:57